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浙江國(guó)檢檢測(cè)

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分享:固相萃取-液相色譜-串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定水中3種六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚A的含量

2025-06-03 11:14:01 

新污染物是指具有生物毒性、環(huán)境持久性和生物累積性等特征,對(duì)生態(tài)環(huán)境或人體健康存在較大風(fēng)險(xiǎn),但尚未納入環(huán)境管理,或者現(xiàn)有管理措施不足以應(yīng)對(duì)的有毒有害化學(xué)物質(zhì)。2022年5月,國(guó)務(wù)院印發(fā)了《新污染物治理行動(dòng)方案》,該方案指出,目前國(guó)內(nèi)外廣泛關(guān)注的新污染物主要有三大類:一是持久性有機(jī)污染物;二是內(nèi)分泌干擾物;三是抗生素。六溴環(huán)十二烷(HBCDs)和四溴雙酚A(TBBPA)屬于持久性有機(jī)污染物,近年來(lái)作為新污染物受到廣泛關(guān)注[1-2]。這兩類物質(zhì)是常見(jiàn)的溴代阻燃劑,因其優(yōu)良的阻燃性能,被廣泛應(yīng)用于建筑材料、車輛、紡織品和家用電器等產(chǎn)品的生產(chǎn)與加工過(guò)程中[3-4]。已有研究證實(shí)HBCDs和TBBPA具有生物富集性[5],并且對(duì)人體及哺乳動(dòng)物有一定毒性[6-7]。國(guó)內(nèi)外研究表明,這兩類物質(zhì)可在各類環(huán)境介質(zhì)和生物體中被不同程度地檢出[8-9]。為了減少HBCDs帶來(lái)的污染,我國(guó)在2021年底全面禁止HBCDs的生產(chǎn)和使用;2023年生態(tài)環(huán)境部制定了《重點(diǎn)管控新污染物清單(2023年版)》,明確HBCDs屬于已淘汰類新污染物,禁止其生產(chǎn)、加工使用以及進(jìn)出口。盡管目前尚無(wú)明確禁止TBBPA生產(chǎn)和使用的法規(guī),但作為新污染物,其與HBCDs性質(zhì)相似,也存在污染環(huán)境的風(fēng)險(xiǎn)。因此,為加強(qiáng)對(duì)這兩類物質(zhì)的風(fēng)險(xiǎn)管控,提高新污染物治理能力,建立針對(duì)這兩類物質(zhì)的快速、有效、可靠且經(jīng)濟(jì)的監(jiān)測(cè)方法十分必要。

我國(guó)在HBCDs和TBBPA的監(jiān)測(cè)技術(shù)方面起步較晚,分析方法以液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[10-11]為主,大多聚焦在食品、土壤和生物體中[12-13],對(duì)水體的測(cè)定研究較少。水中HBCDs和TBBPA的前處理方法主要是液液萃取法,如海洋行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)HY/T 261—2018《海水中六溴環(huán)十二烷的測(cè)定 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》測(cè)定海水中的HBCDs時(shí),使用40 mL正己烷分兩次對(duì)500 mL海水樣品進(jìn)行液液萃??;文獻(xiàn)[10]使用100 mL二氯甲烷分兩次液液萃取水中的HBCDs和TBBPA;文獻(xiàn)[14]使用100 mL二氯甲烷分兩次液液萃取水中的HBCDs,這些方法均需要消耗大量的有機(jī)溶劑。同時(shí),大部分監(jiān)測(cè)方法會(huì)在樣品采集后直接過(guò)濾除去水樣中的懸浮物[14-17],但并未考慮懸浮物中是否含有HBCDs和TBBPA,造成測(cè)定結(jié)果偏低。因此,本工作采用固相萃取-液相色譜-串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定水中3種HBCDs(包括α-HBCD、β-HBCD、γ-HBCD)和TBBPA的含量,將水樣中的懸浮物和水樣作為一個(gè)整體,對(duì)樣品的前處理和儀器工作條件進(jìn)行了優(yōu)化,可滿足大批量水樣的監(jiān)測(cè)分析要求。

1290 UPLC-6460 QQQ MSD型高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀;Auto Vap S8型全自動(dòng)定量濃縮儀;Visiprep DL24位型固相萃取裝置;ChromP固相萃取柱(500 mg/6 mL);HLB固相萃取柱(500 mg/6 mL);GCB固相萃取柱(500 mg/6 mL);氨基柱(500 mg/6 mL)。

3種HBCDs混合標(biāo)準(zhǔn)溶液:α-HBCD、β-HBCD、γ-HBCD的質(zhì)量濃度均為100.0 mg·L−1,溶劑為甲醇,編號(hào)1ST80883-100M。

TBBPA標(biāo)準(zhǔn)溶液:100.0 mg·L−1,溶劑為甲醇,編號(hào)1ST8713-100M。

碳同位素標(biāo)記的α-HBCD(13C12-α-HBCD)標(biāo)準(zhǔn)溶液:50.0 mg·L−1,溶劑為甲苯,編號(hào)CLM-7922-S。

碳同位素標(biāo)記的β-HBCD(13C12-β-HBCD)標(biāo)準(zhǔn)溶液:50.0 mg·L−1,溶劑為甲苯,編號(hào)CLM-7923-S。

碳同位素標(biāo)記的γ-HBCD(13C12-γ-HBCD)標(biāo)準(zhǔn)溶液:50.0 mg·L−1,溶劑為甲苯,編號(hào)CLM-7924-S。

碳同位素標(biāo)記的TBBPA(13C12-TBBPA)標(biāo)準(zhǔn)溶液:50.0 mg·L−1,溶劑為甲醇,編號(hào)CLM-4694-S。

氘代同位素標(biāo)記的α-HBCD(α-HBCD-d18)標(biāo)準(zhǔn)溶液:50.0 mg·L−1,溶劑為甲苯,編號(hào)DaHBCD。

混合標(biāo)準(zhǔn)中間液:分別取適量的3種HBCDs混合標(biāo)準(zhǔn)溶液和TBBPA標(biāo)準(zhǔn)溶液,用甲醇稀釋并定容,配制成質(zhì)量濃度為10.0 mg·L−1的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液。

提取內(nèi)標(biāo)溶液:分別取適量的13C12-α-HBCD標(biāo)準(zhǔn)溶液、13C12-β-HBCD標(biāo)準(zhǔn)溶液、13C12-γ-HBCD標(biāo)準(zhǔn)溶液和13C12-TBBPA標(biāo)準(zhǔn)溶液,用甲醇稀釋并定容,配制成質(zhì)量濃度為1.00 mg·L−1的提取內(nèi)標(biāo)溶液。提取內(nèi)標(biāo)溶液用于修正樣品在前處理過(guò)程中產(chǎn)生的誤差。

進(jìn)樣內(nèi)標(biāo)溶液:取適量的α-HBCD-d18標(biāo)準(zhǔn)溶液,用甲醇稀釋并定容,配制成質(zhì)量濃度為1.00 mg·L−1的進(jìn)樣內(nèi)標(biāo)溶液。進(jìn)樣內(nèi)標(biāo)溶液用于修正儀器進(jìn)樣過(guò)程中產(chǎn)生的誤差。

混合標(biāo)準(zhǔn)溶液系列:取適量的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液,用甲醇逐級(jí)稀釋,加入適量的提取內(nèi)標(biāo)溶液和進(jìn)樣內(nèi)標(biāo)溶液,配制成α-HBCD、β-HBCD、γ-HBCD、TBBPA的質(zhì)量濃度為2.00,5.00,10.0,20.0,50.0,100,200 μg·L−1,提取內(nèi)標(biāo)和進(jìn)樣內(nèi)標(biāo)的質(zhì)量濃度為20.0 μg·L−1的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液系列。

甲醇、乙腈均為色譜純;丙酮、二氯甲烷均為農(nóng)殘級(jí);試驗(yàn)用水為超純水。

Extend C18色譜柱(100 mm×2.1 mm,3.5 μm);流量0.3 mL·min−1;進(jìn)樣量10.0 μL;柱溫35 ℃;流動(dòng)相A為水,B為體積比1∶1的甲醇-乙腈混合溶液。梯度洗脫程序:0~3 min,B由30%升至80%;3~9 min,B由80%升至93%;9~10 min,B由93%降至30%,保持2 min。

電噴霧離子(ESI)源,負(fù)離子(ESI−)模式掃描;干燥氣溫度320 ℃,干燥氣流量6 L·min−1;霧化氣壓力241.3 kPa;鞘氣溫度340 ℃,鞘氣流量11 L·min−1;毛細(xì)管電壓1 500 V;噴嘴電壓2 000 V;多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式。其他質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表1。

表 1質(zhì)譜參數(shù)
Table 1.MS parameters

按照HJ 91.1—2019《污水監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范》的相關(guān)要求,用棕色采樣瓶采集樣品,確保滿瓶采集。在每升水樣中加入80 mg硫代硫酸鈉和5 mL甲醇,混勻,于4 ℃以下避光運(yùn)輸、保存,14 d內(nèi)完成樣品前處理,30 d內(nèi)完成分析。

取1 L樣品,加入20.0 μL提取內(nèi)標(biāo)溶液,混勻,抽濾過(guò)0.45 μm濾膜,收集濾液。將抽濾后的濾膜剪碎置于15 mL離心管中,加入5 mL丙酮,超聲提取20 min,過(guò)0.45 μm聚四氟乙烯(PTFE)針頭式過(guò)濾器,該濾液與抽濾后的濾液合并,過(guò)ChromP固相萃取柱(依次用二氯甲烷、丙酮、甲醇和水各10 mL活化),氮?dú)獯祾吖滔噍腿≈?0 min,用15.0 mL體積比9∶1的二氯甲烷-丙酮混合溶液洗脫,收集洗脫液置于濃縮儀中,氮吹至近干,殘余物用甲醇溶解并定容至1.0 mL,加入20.0 μL進(jìn)樣內(nèi)標(biāo)溶液,混勻,過(guò)0.22 μm PTFE針頭式過(guò)濾器,按照儀器工作條件測(cè)定。

固相萃取法具有操作簡(jiǎn)單、溶劑消耗少,能同時(shí)完成萃取和凈化,并可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化操作等優(yōu)勢(shì)。常用于樣品萃取和凈化的固相萃取柱有鍵合硅膠固相萃取柱(如氨基柱)、無(wú)機(jī)固相萃取柱(如GCB柱)、高聚物固相萃取柱(如HLB柱、ChromP柱),試驗(yàn)考察了上述4種固相萃取柱對(duì)各目標(biāo)化合物萃取效果的影響,結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖 1固相萃取柱對(duì)目標(biāo)化合物回收率的影響
Figure 1.Effect of solid phase extraction columns on recoveries of target compounds

由圖1可知:采用GCB柱時(shí),HBCDs和TBBPA回收率基本為0,可能由于GCB柱對(duì)含有苯環(huán)官能團(tuán)的目標(biāo)化合物(如TBBPA)具有較強(qiáng)的吸附能力[12,18],HBCDs雖不含苯環(huán)但與TBBPA結(jié)構(gòu)相似,導(dǎo)致這兩類目標(biāo)化合物難以被洗脫;采用氨基柱時(shí),TBBPA回收率基本為0,可能由于TBBPA存在兩個(gè)酚羥基,屬于離子型有機(jī)污染物,其pKa1為7.5,在中性環(huán)境中,TBBPA部分會(huì)以陰離子的形式存在,且TBBPA的極性大于HBCDs的,導(dǎo)致其在氨基柱上的保留能力過(guò)強(qiáng),難以被洗脫;采用HLB柱和ChromP柱時(shí),4種目標(biāo)化合物均能被萃取,可能由于HLB柱和ChromP柱填料均為親水親脂型聚合物,可萃取的化合物極性范圍較寬,而采用ChromP柱的回收率均高于HLB柱的,可能因?yàn)镃hromP柱的填料是苯乙烯-二乙烯基苯,更適合萃取芳香型化合物[19-20]。因此,試驗(yàn)選擇的固相萃取柱為ChromP柱。

試驗(yàn)首先嘗試以甲醇為洗脫溶劑,考察了甲醇用量對(duì)各目標(biāo)化合物回收率的影響。結(jié)果顯示:當(dāng)甲醇用量為30 mL時(shí),TBBPA的回收率為80.0%,但HBCDs的回收率僅為50.0%;繼續(xù)增大甲醇用量到50 mL時(shí),HBCDs的回收率仍只有60.0%,可能由于HBCDs是非極性化合物,甲醇的洗脫能力不足。因此,試驗(yàn)選擇洗脫能力更大的溶劑,包括丙酮、二氯甲烷、正己烷及其混合溶液,考察了不同洗脫溶劑(體積比9∶1的正己烷-丙酮混合溶液、體積比1∶1的正己烷-丙酮混合溶液、體積比9∶1的二氯甲烷-丙酮混合溶液、體積比1∶1的二氯甲烷-丙酮混合溶液)對(duì)4種目標(biāo)化合物洗脫效果的影響,結(jié)果見(jiàn)圖2。

圖 2洗脫溶劑對(duì)目標(biāo)化合物回收率的影響
Figure 2.Effect of elution solvents on recoveries of target compounds

由圖2可知:采用體積比1∶1的正己烷-丙酮混合溶液作為洗脫溶劑時(shí),3種HBCDs的回收率較差;采用其余3種混合溶液作為洗脫溶劑時(shí),4種目標(biāo)化合物的回收率均大于80.0%??紤]到二氯甲烷的揮發(fā)性優(yōu)于正己烷的,且采用體積比9∶1的二氯甲烷-丙酮混合溶液作為洗脫溶劑時(shí),4種目標(biāo)化合物的回收率最高,試驗(yàn)選擇的洗脫溶劑為體積比9∶1的二氯甲烷-丙酮混合溶液。

試驗(yàn)進(jìn)一步考察了不同用量(1.5,3.0,4.5,6.0,7.5,9.0,10.5,12.0,13.5,15.0 mL)洗脫溶劑對(duì)4種目標(biāo)化合物回收率的影響。結(jié)果顯示,當(dāng)洗脫溶劑用量為10.5 mL時(shí),4種目標(biāo)化合物的回收率基本達(dá)到最大,繼續(xù)增大洗脫溶劑用量并不能提高目標(biāo)化合物的回收率??紤]到不同批次固相萃取柱的差異,試驗(yàn)選擇的洗脫溶劑用量為15.0 mL。

由于TBBPA存在兩個(gè)酚羥基,溶液酸度會(huì)影響TBBPA的存在狀態(tài),試驗(yàn)以空白加標(biāo)樣品(加標(biāo)量為5.0 ng·L−1)為研究對(duì)象,考察了不同溶液酸度(pH 1,2,4,7,8)對(duì)4種目標(biāo)化合物回收率的影響。結(jié)果顯示:當(dāng)溶液pH為1時(shí),4種目標(biāo)化合物的回收率均較低;當(dāng)溶液pH為2~8時(shí),4種目標(biāo)化合物的回收率沒(méi)有明顯差異,可能與ChromP柱的填料為親水親脂型聚合物有關(guān)。為了簡(jiǎn)化操作,提高樣品前處理效率,試驗(yàn)不額外調(diào)節(jié)溶液酸度。

試驗(yàn)以加標(biāo)地表水(加標(biāo)量為20 ng·L−1)為研究對(duì)象,分別對(duì)經(jīng)0.45 μm濾膜抽濾后的水樣、抽濾后的濾膜(水樣中懸浮物以顆粒物形式吸附在濾膜上)進(jìn)行前處理,考察了4種目標(biāo)化合物在水中和顆粒物中的分布狀況。結(jié)果顯示,TBBPA在抽濾后的濾膜上基本未被檢出,而HBCDs有近33%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))分布在顆粒物中,可能與目標(biāo)化合物的性質(zhì)有關(guān),HBCDs是非極性化合物,而TBBPA具有一定極性且存在兩個(gè)酚羥基,相較于HBCDs,TBBPA在水中具有更好的溶解性。因此,測(cè)定水樣時(shí)需對(duì)抽濾后的濾膜進(jìn)行提取。

超聲是固體樣品常用的提取方法,利用“空化效應(yīng)”產(chǎn)生的沖擊波,使溶液湍流加快,加速熱傳遞并與溶質(zhì)分散,從而增強(qiáng)提取溶劑與水樣間的質(zhì)量傳輸,提高提取效率。試驗(yàn)固定超聲提取時(shí)間20 min,提取溶劑5 mL,考察了不同提取溶劑(甲醇、丙酮和二氯甲烷)對(duì)抽濾后的濾膜中HBCDs提取效率的影響。結(jié)果顯示,采用丙酮和二氯甲烷提取時(shí),HBCDs的回收率相差不大,但采用甲醇提取時(shí),回收率較低,這可能與HBCDs的非極性性質(zhì)有關(guān)??紤]到超聲提取液中可能含有基質(zhì)干擾物質(zhì),需對(duì)超聲提取液進(jìn)行固相萃取凈化處理,而二氯甲烷與水不互溶,試驗(yàn)選擇丙酮作為提取溶劑。

研究表明,流動(dòng)相中乙腈有利于β-HBCD和γ-HBCD的分離,甲醇有利于α-HBCD和β-HBCD的分離[21]。試驗(yàn)考察了流動(dòng)相體系中的不同有機(jī)相(甲醇、乙腈、體積比1∶1的甲醇-乙腈混合溶液)對(duì)3種HBCDs分離效果的影響。結(jié)果顯示:當(dāng)有機(jī)相為甲醇時(shí),β-HBCD和γ-HBCD色譜峰的分離度較低;當(dāng)有機(jī)相為乙腈時(shí),α-HBCD和β-HBCD色譜峰的分離度較低;當(dāng)有機(jī)相為體積比1∶1的甲醇-乙腈混合溶液時(shí),3種HBCDs色譜峰的分離效果最好,且與基線分離。因此,試驗(yàn)選擇體積比1∶1的甲醇-乙腈混合溶液作為流動(dòng)相體系中的有機(jī)相。

增大進(jìn)樣量能提高方法的靈敏度,但進(jìn)樣量過(guò)大可能影響目標(biāo)化合物的分離度和峰形,進(jìn)而影響目標(biāo)化合物的定性定量。試驗(yàn)以100 μg·L−1混合標(biāo)準(zhǔn)溶液為研究對(duì)象,考察了進(jìn)樣量為1.0~20.0 μL時(shí)4種目標(biāo)化合物峰形的變化情況。結(jié)果顯示:當(dāng)進(jìn)樣量由1.0 μL增大至10.0 μL時(shí),4種目標(biāo)化合物的峰形無(wú)明顯變化,峰響應(yīng)強(qiáng)度則逐漸增強(qiáng);當(dāng)進(jìn)樣量增大至20.0 μL時(shí),4種目標(biāo)化合物均出現(xiàn)不同程度的前展現(xiàn)象,其中TBBPA的峰形變化最為明顯。這可能因?yàn)榛旌蠘?biāo)準(zhǔn)溶液的溶劑為甲醇,而初始流動(dòng)相僅含30%(體積分?jǐn)?shù))有機(jī)相,當(dāng)進(jìn)樣量較小時(shí),目標(biāo)化合物在色譜柱中的擴(kuò)散尚可在較短時(shí)間內(nèi)完成,不影響目標(biāo)化合物的峰形,而隨著進(jìn)樣量逐漸增大,目標(biāo)化合物總量逐漸增大,當(dāng)進(jìn)樣量增大到一定量時(shí),目標(biāo)化合物在色譜柱前端無(wú)法充分?jǐn)U散,進(jìn)而導(dǎo)致峰形發(fā)生扭曲。為了保證色譜峰峰形,同時(shí)得到最佳的檢出限,試驗(yàn)選擇的進(jìn)樣量為10.0 μL,得到的MRM色譜圖見(jiàn)圖3。

圖 3100 μg·L−1混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的MRM色譜圖
Figure 3.MRM chromatogram of 100 μg·L−1mixed standard solution

按照儀器工作條件測(cè)定混合標(biāo)準(zhǔn)溶液系列,以目標(biāo)化合物與提取內(nèi)標(biāo)的質(zhì)量濃度之比為橫坐標(biāo),以目標(biāo)化合物與提取內(nèi)標(biāo)的響應(yīng)強(qiáng)度之比為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果顯示,4種目標(biāo)化合物標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍均為2.00~200 μg·L−1,線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表2。

表 2線性參數(shù)、檢出限和測(cè)定下限
Table 2.Linearity parameters, detection limits and lower limits of determination

平行配制7份空白加標(biāo)樣品(加標(biāo)量為2.00 ng·L−1)并進(jìn)行測(cè)定,依據(jù)HJ 168—2020《環(huán)境監(jiān)測(cè)分析方法標(biāo)準(zhǔn)制訂技術(shù)導(dǎo)則》計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)偏差s,以3.143s計(jì)算檢出限,以4倍檢出限計(jì)算測(cè)定下限,結(jié)果見(jiàn)表2。

對(duì)地表水樣品進(jìn)行3個(gè)濃度水平的加標(biāo)回收試驗(yàn),每個(gè)濃度水平重復(fù)測(cè)定6次,計(jì)算回收率和測(cè)定值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD),結(jié)果見(jiàn)表3。

由表3可知,4種目標(biāo)化合物的回收率為88.4%~129%,測(cè)定值的RSD為2.3%~15%,表明該方法準(zhǔn)確度和精密度較好,可以滿足痕量分析的需求。

將本方法與現(xiàn)有的分析方法進(jìn)行比對(duì),結(jié)果見(jiàn)表4。

表 4方法比對(duì)結(jié)果
Table 4.Results of method comparison

由表4可知:樣品的前處理方法主要為液液萃取或固相萃取。采用固相萃取時(shí),由于水樣中含有一定量的懸浮物,一般會(huì)使用0.45 μm濾膜對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理,而本方法顯示懸浮物中存在一定量的HBCDs,因此測(cè)定水樣時(shí)需考慮懸浮物中HBCDs的含量;采用液液萃取時(shí),雖然萃取了懸浮物中的目標(biāo)化合物,但需要消耗較多的有機(jī)溶劑。本方法將水樣中的懸浮物和水樣作為一個(gè)整體,既萃取了水樣和懸浮物中的目標(biāo)化合物,又大幅減少了有機(jī)溶劑的消耗,檢出限等方面優(yōu)于部分文獻(xiàn),能滿足水樣中HBCDs和TBBPA的測(cè)定需求。

按照試驗(yàn)方法分析在湖北省內(nèi)采集的32個(gè)地表水樣品和2個(gè)廢水樣品。結(jié)果顯示:在地表水樣品中,29個(gè)樣品中均未檢出4種目標(biāo)化合物,1個(gè)樣品中檢出TBBPA,檢出量為1.4 ng·L−1,1個(gè)樣品中檢出3種HBCDs,檢出量為0.5~1.7 ng·L−1,1個(gè)樣品中檢出α-HBCD、TBBPA,檢出量分別為1.9,1.4 ng·L−1;在廢水樣品中,2個(gè)樣品中均檢出TBBPA,檢出量分別為1.4,17.8 ng·L−1。檢測(cè)結(jié)果與文獻(xiàn)[25-26]基本一致,說(shuō)明湖北省的部分水體已存在輕微的HBCDs和TBBPA污染。

本工作采用固相萃取-液相色譜-串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定水中3種HBCDs和TBBPA的含量。該方法前處理簡(jiǎn)便高效、可自動(dòng)化,靈敏度、精密度和準(zhǔn)確度較高,可滿足水樣中HBCDs和TBBPA的測(cè)定。




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